SENZITIVITA ADENYLÁTCYKLÁZOVÉHO SYSTÉMU LYMFOCYTŮ
Izolace lymfocytů, jejich inkubace pro stanovení bazální a isoprenalinem a forskolinem stimulované adenylátcyklázové aktivity prostřednictvím jejího produktu cAMP.
+7 bodůoproti 2025
Vývoj v čase
- Nositelé výkonu
- Kategorie úhrady
- Kategorie: P – hrazen plně
- Doba výkonu
- 20 min
- Čas nositele VZP
- 20
- Typ formuláře
- Ambulantní
- Frekvenční omezení
- 4/1 den, 1/1 čtvrtletí
- Omezení místem
- S – pouze na specializovaném pracovišti
Průběh výkonu
Zahájení
Odebráním 10 ml krve do zkumavky s heparinem.
Průběh
Příprava roztoků, zkumavek, lahviček (40 min). Lymfocyty jsou izolovány odstředěním krve v hustovém gradientu Ficoll-verografinu a 3krát promývány a odstřeďovány (70 min). Izolované lymfocyty jsou spočítány v Bürkerově komůrce (20 min), stanovena vitalita buněk (10 min), suspendovány v pufru a rozpipetovány do zkumavek bez nebo obsahujících isoprenalin, forskolin nebo obě látky dohromady. Po 10 min. inkubace v Dubnoffově metabolickém inkubátoru jsou buňky homogenizovány (15 min) a na vroucí vodní lázni denaturovány (7 min). Po odstředění (30 min) je supernatant rozpipetován do Eppendorfek, uchován při -20 stupníchC až do doby stanovení cAMP. Stanovení cAMP je prováděno soupravou firmy IMMUNOTECH, stanovení je dvoudenní. Spočívá v pipetování standardů, vzorků, značeného 125 J-cAMP, (30 min). Vazebný protein je navázaný na stěně inkubačních zkumavek. Inkubace trvá 18 min. při 4 stupních C. Potom je supernatant odstát (5 min.) a radioaktivita je měřená na nukleárním počítači (35 min.). Výsledky jsou vypsány do protokolu a obsah cAMP vypočítán na 1 milion buněk.
Ukončení
Výpočtem a vyhodnocením výsledků.
Materiály (13)
- 35,2 bodů
- 124,8 bodů
- 0,15 bodů
- 6,31 bodů
- 56,97 bodů
- 3,5 bodů
- 11 bodů
- 108 bodů
- 1,08 bodů
- 18 bodů
- 129,93 bodů
- 10 bodů
- 0 bodů