STANOVENÍ ALFA-ADRENERGNÍCH RECEPTORŮ NA TROMBOCYTECH PŘÍPADNĚ DALŠÍCH KREVNÍCH ELEMENTECH
Izolace a centrifugace trombocytů, inkubace trombocytů s různými koncentracemi znač. radioligandu 3H-yohimbinu, separace vázaného radioligandu filtrací, změření radioaktivity, výpočet počtu a afinity receptorů, zhodnocení výsledků.
+24 bodůoproti 2025
Vývoj v čase
- Nositelé výkonu
- Kategorie úhrady
- Kategorie: P – hrazen plně
- Doba výkonu
- 70 min
- Čas nositele VZP
- 70
- Typ formuláře
- Ambulantní
- Frekvenční omezení
- 1/1 den
- Omezení místem
- S – pouze na specializovaném pracovišti
Průběh výkonu
Zahájení
Odběrem 9 ml krve do zkumavky s citrátem sodným
Průběh
Příprava roztoků,zkumavek,lahviček(60min).Membrány trombocytů jsou připravovány odstředěním krevního vzorku (220xg,25 min)pro získání plasmy bohaté na trombocyty (PBT). PBT je centrifugována při1100xg (15 min4 stupněC).Supernatant je spojen s předchozím sedimentem,resuspendován a centrifugován (270xg,25 min).Druhá PBT je rovněž odstředěna při 1100xg (15 min).Oba sedimenty jsou potom spojeny,2x promyty (centrifugace 2x25 min).Po obarvení a spočítání trombocytů (70 min) jsou zhomogenizovány (5 min)a homogenát je za chladu odstředěn (15000xg,15 min).Výsledný sediment je užit pro vazbu 3H-yohimbinu v koncentracích 0.5-12 nmol/l. Do inkubačních zkumavek je pipetován homogenát,pufr,radioligand, phentolamin (pro zjištění nespecifické vazby) (20 min).Inkubace trvá 20 min při 37stupíchC, potom jsou vzorky filtrovány (40 min), filtry vloženy do scintilačních lahviček se scintilačním roztokem (10 min), radioaktivita je měřena na scintilačním spektrofotometru (1 vzorek 4min,celkem 80 min).Počet a afinita receptorů jsou počítány pomocí speciálního programu na počítači (15 min) a výsledky jsou vyhodnocovány (5 min).
Ukončení
Výpočtem a vyhodnocením výsledků.
Materiály (9)
- 22 bodů
- 0,4 bodů
- 0,12 bodů
- 27,11 bodů
- 3,5 bodů
- 11 bodů
- 40 bodů
- 726,43 bodů
- 0,2 bodů