VYŠETŘENÍ DPM STANOVENÍM METABOLITŮ PLYNOVOU CHROMATOGRAFIÍ (VLCFA, KYS. FYTANOVÁ A JINÉ) KALKULOVÁNO VYŠETŘENÍ VLCFA

Průběh výkonu

1. 1

   Zahájení

   Zapisem požadaku na vyšetření do pracovního listu metody, přípravou přístroje a roztoků.

2. 2

   Průběh

   Do zatavovací ampulky se napipetuje příslušné množství biologického materiálu, roztoku vnitřního standardu, methanolu, methylenchloridu a acetylchloridu. Ampulka se chladí ve směsi suchého ledu a ethanolu a zataví se. Hydrolýza a remethylace probíhá 1 hodinu v pícce při 80 st.C.. Reakce se zastavuje roztokem uhličitanu, vzniklé methylestery se extrahují do hexanu. Hexanová vrstva stažená po centrifugaci se promývá 2 krát acetonitrilem. Čistý hexanový extrakt se stáhne do chromatografické vialky a odpaří se ve vakuové odparce. Odparek se rozpustí ve 200 uL hexanu. 1 - 2 uL se nastřikují k chromatografické analýze do kolony GC. Protože se VLCFA nacházejí ve vzorcích ve stopových koncentracích, je nutno používat rozpouštědla kvality "HPLC či spektrofotometric grade" a vyšetření se provádí v dubletu. Ve vzorku se hodnotí absolutní koncentrace VLCFA a jejich vzájemné poměry, analytická a lékařská kontrola výsledku, zapsání výsledku do nálezové zprávy pacienta, příprava výsledku k expedici. Ve výkonu jsou zahrnuty náklady na vlastní vyšetření a kalibraci.

3. 3

   Ukončení

   Archivací výsledku.