STANOVENÍ SUKCINYLACETONU V TĚLESNÝCH TEKUTINÁCH

Průběh výkonu

1. 1

   Zahájení

   Zapsáním požadavku na provedení výkonu do pracovní knihy.

2. 2

   Průběh

   Míra inhibice aminolevulinát dehydratasy je pro porcionální koncentraci succinylacetonu. Porfobilinogen je stanoven fotometricky Ehrlichovým činidlem. Zdrojem aminolevulinát dehydratasy jsou erytrocyty, které se odeberou ze žíly a připraví se 20% lysát (voda) s přidáním Tritonu X-100. Na 1 stanovení je zapotřebí 0.5ml lysátu. Vzorek (moč naředěná 100x, sérum naředěné 10x, amniová tekutina) se vaří s 1 dílem fosfátového pufru (pH 6.1,04 mol/1, 1.5 ml na stanovení) ve zkumavkách se šroubovacím víčkem ve vodní lázni. Po ochlazení se inkubuje vzorek s dithiotreitolem a lysátem 30 min. v plastikové zkumavce. Přidá se vzorek substrátu (kyselina aminolevulová, pufrovaná K2HPO4, nutno připravit čerstvě) a reakční směs se inkubuje po dobu 30 minut při 37°C.. Následuje deproteinace a fotometrické stanovení Ehrlichovým činidlem. V každé sérii vzorků je nutno současně zpracovat i sérii standardních roztoků succinylacetonu, ze kterých se poté konstruuje kalibrační křivka. Vzhledem k tomu, že se aktivita lysátu může vzorek od vzorku lišit, je třeba standardy změřit při každém stanovení. Stanovení se provádí v doubletu. Vzhledem k možnému ovlivnění aktivity těžkými kovy /Pb/ je nutno používat chemikálie nejvyšší čistoty a plastikové zkumavky.

3. 3

   Ukončení

   Archivací výsledku.